细胞介绍

SH-SY5Y是1970年建自骨瘤转移灶的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系经三次克隆后的亚系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。 该细胞显示中等水平的多巴胺-β-羟基酶活性。SH-SY5Y细胞的饱和密度大于1X10^6细胞/cm2。

细胞特性

1） 来源：脑神经母细胞瘤，转移部位骨髓

2） 形态：上皮细胞样，半贴壁（贴壁和悬浮同时存在）生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5） 用途：仅供科研使用。

一、培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备MEM 基础培养基                       （iCell-0012）                      43%

        Ham's F-12 基础培养基                     （iCell-0006）                      43%

        优质胎牛血清                                     （iCell-0500）                      10%

        MEM NEAA非必需氨基酸                  (iCell-01000)                       1%

        Sodium Pyruvate丙酮酸钠                    ( iCell-01100 )                     1%

        GlutaMAX-1谷氨酰胺                           ( iCell-0900 )                      1%

        P/S青霉素-链霉素                             （iCell-15140-122）              1%

备注：该细胞为贴壁和悬浮同时存在，换液和传代时需要分别回收贴壁和悬浮细胞，否则细胞会越来越少。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

该细胞轻微贴壁和悬浮培养的细胞，传代可以参考以下方法：

1. 收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3. 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3） 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。