细胞描述

Lewis肺癌是一种从C57BL小鼠的肺中建立的细胞系，该细胞带有原发性Lewis肺癌的植入所致的肿瘤，被广泛用作转移的模型，可用于研究癌症化学治疗剂的机制。

细胞特性

1）来源：小鼠肺癌组织

2）形态：半贴壁生长，混合形态，有上皮细胞样，松散贴壁或悬浮有梭形、圆形等细胞形态 。

3）含量：含量：>1x10^6  细胞数

4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5）用途：仅供科研使用。

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备DMEM（推荐iCell-0001）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%

注意：此细胞贴壁不牢，生长前期悬浮细胞较多，后期贴壁细胞较多，建议传代和换液时回收培养基中悬浮的细胞。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

该细胞为轻微贴壁和悬浮培养的细胞，传代可以参考以下方法：

1. 收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3. 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3） 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。