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锰过氧化物酶(MnP)检测试剂盒(可见分光光度法)
锰过氧化物酶(MnP)检测试剂盒(可见分光光度法)图片
包装: 50管/24样
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产品介绍

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

锰过氧化物酶(EC 1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,主要存在于担子菌中,属于木质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物,叠氮化合物、DTT,多环芳烃等。锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下,将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,在465nm有特征吸收峰。

产品内容:

试剂一:液体75ml×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体5ml×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体10ml×1瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体5ml×1瓶,4℃保存。

需自备的仪器和用品:

天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、恒温水浴锅。

操作步骤:

一、酶液提取

1、组织:按照质量(g):试剂一体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1ml试剂一)加入试剂一,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

2、细胞:按照细胞数量(104个):试剂一体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

3、培养液或其它液体:直接检测。

二、测定操作

试剂名称(μL)对照管测定管
试剂一600500
试剂二
100
试剂三200200
样品100100
试剂四100100
充分混匀,于37℃反应10min,于1ml玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定465nm处吸光值,记为A对照管和A测定管,△A=A测定管- A对照管。

三、酶活计算公式

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/mg prot)=△A÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T= 83×△A÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义:每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/g)=△A÷(ε×d)×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T= 83×△A÷W

3.按照细胞数量计算

酶活性定义:每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/104cell)=△A÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T = 83×△A÷细胞数量

4.按照液体体积计算

酶活性定义:每升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/L)=△A÷(ε×d)×V反总÷V样÷T= 8.3×104×△A

ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,1ml;V样:反应中样本体积,0.1ml;V样总:加入提取液体积,1ml;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;W:样本质量,g;T:反应时间,10min。

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