兔淋巴细胞功能相关抗原3（LFA-3/CD58）ELISA检测需严格按照双抗体夹心法流程操作，关键在于规范样本处理、精准试剂准备与标准化孵育洗板，以确保定量结果准确可靠‌。

一、可检测的样本类型

ELISA试剂盒可检测以下‌兔源性液体样本‌中的LFA-3/CD58含量：

‌血清‌：静置凝固后离心获取

‌血浆‌：使用EDTA、柠檬酸钠或肝素抗凝管采集

‌细胞培养上清液‌：分泌性抗原检测

‌组织匀浆液‌：经PBS稀释并匀浆处理

‌尿液、脑脊液、腹水等体液‌：需离心去除颗粒物

禁止使用含NaN₃的样本‌，因其会抑制HRP酶活性，导致假阴性结果。

二、试剂准备与平衡

‌试剂盒组成‌（典型96T配置）：

酶标包被板（已包被抗兔LFA-3/CD58抗体）

标准品（冻干或液态）

标准品稀释液

HRP标记检测抗体

显色剂A/B液

终止液

浓缩洗涤液（20×或30×）

‌使用前准备‌：

所有试剂从2–8℃取出，‌室温平衡30分钟‌

洗涤液用蒸馏水按比例稀释（如20×→1×）

标准品按说明书梯度稀释，现配现用

移液器、吸头、洗板机等设备提前校准

注意‌：不同批次试剂不可混用，未用完的酶标板条应密封+干燥剂保存