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5-Bromo-3-indolyl β-D-galactopyranoside

MCE 国际站：5-Bromo-3-indolyl β-D-galactopyranoside

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-137276

CAS 号：97753-82-7

生物活性：5-溴-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷（Bluo-Gal）是β-半乳糖苷酶的显色底物。该酶水解5-溴-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷生成5-溴吲哚中间体，后者进一步氧化形成不溶性蓝色沉淀。5-溴-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷能够特异性识别细菌β-半乳糖苷酶（例如大肠杆菌lacZ基因产物），并在pH 7.4下发生反应，因此适用于光镜和电镜观察。5-溴-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷可用于转基因生物中报告基因表达的组织化学检测，例如小鼠胚胎或肌肉组织中β-半乳糖苷酶活性的定位分析[1][2]。

体外研究(In Vitro)：指南 (以下为我们推荐的实验方案。本方案仅作为参考指南，具体操作应根据您的实际需求进行调整)。 5-Bromo-3-indolyl β-D-galactopyranoside 的使用示例[1] 实验材料 1. 组织样本：转基因小鼠骨骼肌组织 (如胫骨前肌)，对照组为非转基因小鼠同部位组织。 2. 固定液： - 配方：2.5% 戊二醛 (glutaraldehyde) + 1% 多聚甲醛 (paraformaldehyde)，溶于 0.1 M 磷酸盐缓冲液 (PBS，pH 7.4)。 - 其他测试配方：包括不同浓度戊二醛与多聚甲醛混合液，或单一醛类固定液。 3. 显色底物溶液： - 1 mg/mL Bluo-Gal (溶于 DMSO，40 mg/mL 母液，-20°C 避光保存)。 - 10 mM 铁氰化钾 (K3[Fe(CN)6]) - 10 mM 亚铁氰化钾 (K4[Fe(CN)6]) - 2 mM MgCl2 - 0.1 M PBS (pH 7.4) 4. 后固定液：1% 锇酸 (OsO4)，溶于0.2 M colloidine buffer，pH 7.4。 5. 脱水试剂：梯度乙醇 (25%、50%、75%、95%、100%)、环氧丙烷 (propylene oxide)。 6. 包埋试剂：环氧树脂 (Epoxy resin)。 实验步骤 1. 组织固定 取材：迅速取材小鼠胫骨前肌，切成约 1-2 mm3 小块。 固定条件：
- 将组织块浸入 2.5% 戊二醛+1% 多聚甲醛混合液，4°C 固定 3 小时 (最佳时间，避免过长固定导致酶活性下降)。
- 对照组 (非转基因小鼠) 同步处理，排除内源性 β-半乳糖苷酶干扰。 2. 漂洗 - 固定后，用 0.1 M PBS (pH 7.4) 漂洗组织 1 小时，去除残留固定液。 3. Bluo-Gal 显色孵育 - 底物配制：临用前将 Bluo-Gal 母液 (40 mg/mL DMSO) 稀释至 1 mg/mL，加入铁氰化钾、亚铁氰化钾和 MgCl2，混匀 (避光操作，防止底物分解)。 - 孵育条件： - 组织浸入底物溶液，30-32°C 孵育 3-4 小时 (最佳显色时间，过夜孵育不影响染色强度，但无需延长)。 - 对照组 (不加底物) 同步孵育，验证无内源性活性。
4. 后固定 (电子显微镜观察用) - 显色后组织用 1% 锇酸溶液 4°C 后固定 1 小时，增强结构对比度。 5. 脱水与包埋 - 梯度脱水：组织经 25%、50%、75%、95% 乙醇各 10-20 分钟，100% 乙醇两次 (每次 20 分钟)。
- 透明处理：环氧丙烷浸泡两次，每次 10-20 分钟 (避免过长时间导致反应产物溶解)。 - 包埋：环氧树脂包埋，60°C 聚合 24 小时。
6. 切片与观察 - 半薄切片 (光镜) ：切 0.5-1 μm 切片，微分干涉相差 (DIC) 显微镜观察，β-半乳糖苷酶阳性区域呈蓝色针状结晶。 - 超薄切片 (电镜) ：切 80 nm 切片，铀铅双染色，透射电镜观察酶活性产物的亚细胞定位。 关键参数与优化 1. 固定液选择：2.5% 戊二醛+1% 多聚甲醛混合液平衡酶活性保存与组织形态，优于单一醛类固定液 (表1)。 2. 孵育时间：3 小时固定+3-4 小时显色即可获得强蓝色沉淀，避免过度固定 (6-12 小时) 导致酶活性显著下降。 3. 对照实验：非转基因小鼠组织不加底物孵育，确认无背景染色。 4. 底物特性：Bluo-Gal 生成的 5-溴靛蓝沉淀为双折射针状晶体，比 X-Gal 更易在低倍镜下识别，且抗有机溶剂洗脱。
注意事项 - 避光操作：Bluo-Gal 母液及工作液需避光保存和使用，防止光降解。 - 温度控制：固定与孵育步骤均需在低温 (4°C) 或温和温度 (30-32°C) 下进行，避免酶活性丧失。 - 脱水时间：环氧丙烷处理时间不宜过长 (≤20 min)，减少反应产物溶解。 MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 仅供参考。

分子量：374.18

Formula：C14H16BrNO6

性状：固体

颜色：White to off-white

运输条件：美国大陆地区的室温；其他地区可能有所不同。

储存方式： 4°C，避光保存 *溶剂保存：-80°C，6个月；-20°C，1个月（避光保存）

提供质量检测报告：Data Sheet、SDS、COA、产品使用指南

产品活性：5-Bromo-3-indolyl β-D-galactopyranoside (Bluo-Gal) 是一种 β-半乳糖苷酶 (β-galactosidase) 的显色底物，通过被该酶水解生成 5-溴吲哚中间体，进一步氧化形成不溶性蓝色沉淀。5-Bromo-3-indolyl β-D-galactopyranoside 可特异性识别细菌来源的β-半乳糖苷酶 (如大肠杆菌 lacZ 基因产物)，在 pH 7.4 条件下反应，适用于光镜及电子显微镜观察。5-Bromo-3-indolyl β-D-galactopyranoside 可应用于转基因生物中报告基因表达的组织化学检测，如小鼠胚胎或肌肉组织中 β-galactosidase 活性的定位分析。

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客户发表文献：
[1]. Nature. 2026 Sep;657(8131):549-558.
[2]. Nature. 2026 Sep;657(8132):755-764.
[3]. Nature. 2026 Sep;657(8133):1027-1034.
[4]. Nature. 2026 Sep;657(8131):477-486.
[5].Nature. 2026 Sep;657(8132):789-799.
[6]. Nature. 2026 Sep;657(8131):517-524.
[7]. Nature. 2026 Sep;657(8133):1045-1052.
[8]. Cell. 2026 Sep 14:S0092-8674(26)01003-2.
[9]. Cell. 2026 Sep 3;189(18):5688-5705.e13.
[10]. Cell. 2026 Sep 2:S0092-8674(26)00937-2.

参考文献：
[1]. Gioglio L, et al. An improved method for beta-galactosidase activity detection on muscle tissue. A light and electron microscopic study. Ann Anat. 2002;184(2):153-157.
[2]. Blanco MJ, et al. Tracing Gene Expression Through Detection of β-galactosidase Activity in Whole Mouse Embryos. J Vis Exp. 2018 Jun 26;(136):57785.