基本信息

产品描述

HA14-1是一种Bcl-2表面口袋的非肽配体，IC50为9 μM左右。

靶点（IC50 & Targe）

Bcl-2,9μM

体外研究

HA14-1是 Bcl-2的小分子非肽配体，分子量为409，IC50 约为 9 μM。HA14-1 通过激活caspase而诱导HL-60细胞凋亡，这种作用具有剂量依赖性。[1] HA14-1作用于滤泡性淋巴瘤细胞系HF1A3, HF4.9 和 HF28RA，具有细胞毒性，LC50分别为4.5 μM, 12.6 μM 和8.1 μM。HA14-1 通过caspase 和 ROS诱导HF1A3, HF4.9 和 HF28RA细胞凋亡。[2]

体内研究

HA14-1(400 nM)处理免疫缺陷小鼠，对胶质母细胞瘤的生长没有任何重大影响。但是，HA14-1(400 nM)在体内促进DNA损伤剂Etoposide (2.5 mg/Kg) 对胶质母细胞瘤生长的作用效果。[3]

激酶实验

亲和测定:

根据荧光偏振，通过竞争性结合测定法，测定在体外有机化合物与 Bcl-2蛋白结合的亲和力。实验中，5-羧基荧光素偶联到肽的N末端，GQVGRQLAIIGDDINR来Bak的BH3结构域(Flu-BakBH3)，高亲和力结合到Bcl-xL蛋白的表面口袋中。根据我们的分子模拟研究和利用荧光偏振进行结合测定，Flu-BakBH3肽结合到Bcl-2的表面口袋具有相似的亲和力。实验中Bcl-2作为重组GST融合的可溶性蛋白。在标准缓冲液环境下，在有或无有机化合物时，Flu-BakBH3 和 Bcl-2蛋白混合温育30分钟。使用双路径长度石英池(500 μl)，在配备偏振光片的LS-50荧光光谱仪上测量Flu-BakBH3与Bcl-2蛋白的结合力。通过测定不同浓度化合物抑制Flu-BakBH3与Bcl-2结合的能力而测评不同化合物与Bcl-2蛋白的结合亲和力。

细胞实验

Cell lines: HF1A3, HF4.9 和 HF28RA

Concentrations: 0-25 μM

Incubation Time: 20 小时

Method:通过MTT法测定HA14-1作用于不同 FL 细胞系的毒性。在有或无HA14-1的情况下，细胞(5000/每孔)按一式三份在96孔板中 37°C下温育20小时。然后每孔加入MTT 溶液。在37°C下温育4小时后, 使用96孔板酶标仪测定光密度(OD)。使用以下公式: 细胞存活百分数=(实验组OD值/对照组OD值) × 100。绘制S型剂量反应曲线，使用Prism 4.0软件计算50% 致死浓度值(LC50) 。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 携带 BeGBM 移植瘤的雌性Swiss裸鼠

Formulation: HA14-1 在100 μL free RPMI 1640-50% DMSO中配制

Dosages: 400 nM

Administration: 在细胞注射位点注射

(Only for Reference)

参考文献

[1] Wang JL, et al. Proc Natl Acad Sci, 2000, 97(13), 7124-7129.

[2] Skommer J, et al. Leuk Res, 2006, 30(3), 322-331.

[3] Manero F, et al. Cancer Res, 2006, 66(5), 2757-2764.

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