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技术规格

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产品描述

DAPT (GSI-IX)是一种新型γ-secretase抑制剂，抑制 Aβ产生，在HEK 293细胞中IC50为20 nM。

靶点（IC50 & Targe）

γ secretase(Aβ),20nM

Aβ,115 nM (in human primary neuronal cultures)

Aβ42,200 nM (in human primary neuronal cultures)

体外研究

DAPT功能性抑制γ-分泌酶而降低HEK 293细胞中全部Aβ产量，IC50为20 nM。DAPT作用于原代培养的人神经细胞，也抑制Aβ产量，作用于全部Aβ和Aβ42时, IC50分别为115 nM和200 nM，比作用于HEK 293细胞时低5-10倍。最新研究显示DAPT 抑制SK-MES-1 细胞增殖，这种作用存在浓度依赖性，IC50为11.265 μM。此外, DAPT作用于肺鳞状细胞癌细胞，通过抑制Notch受体信号通路，也诱导依赖型和非依赖型细胞凋亡。[1]

体内研究

DAPT按100mg/kg剂量处理PDAPP小鼠，产生强劲和持久的药效，1小时内脑中 DAPT水平超过100 ng/g ，且处理后，持续上升达18小时，3小时后的时候观察到最高水平为490 ng/g。在此期间, DAPT 按100 mg/kg剂量处理，也降低大脑皮层全部Aβ和Aβ42，这种作用存在剂量依赖性，降低50%。[1] DAPT按40 mg/kg剂量作用于大鼠大脑皮层, 抑制LPS诱导的γ分泌酶活性，且提高携带长期神经炎症的细胞凋亡。[3]

激酶实验

体外Aβ减少检测实验 :

转染APP751(HEK 293)基因的人类胚胎肾细胞，用于常规 Aβ减少检测。细胞接种在96孔板上，在含10%热灭活胎牛血清的DMEM培养基上粘附过夜。 DAPT 在 DMSO中稀释，终浓度为0.1% DMSO。使用DAPT在37oC下预处理细胞2小时，吸除培养基，使用新鲜实验化合物溶液。再处理2小时后，抽除条件培养基，使用标准 ELISA(266-3D6)分析全部Aβ。根据使用 0.1% DMSO 处理的对照组细胞，测量Aβ产量的减少，表示为抑制百分数。实验至少按6种剂量重复进行，得到实验数据，然后使用XLfit软件拟合四参数方程，测定 药性。培养的人和PDAPP小鼠神经细胞在无血清培养基上生长，增强他们的神经元特性，其中有90%以上神经元在实验使用前成熟。通过在每孔中加入新鲜培养基，然后在没有DAPT存在时，在37oC下温育24小时，收集条件培养基中得到的基底Aβ值。使用含DAPT的新鲜培养基，按所需浓度范围在37oC下再处理培养细胞24小时，收集条件培养基。为了测量全部Aβ,使用与HE2K 293细胞实验 相同的ELISA(266-3D6) 分析样本。通过分开的ELISA(21F12-3D6)，使用特定Aβ42 C-端捕获抗体，进行Aβ42 产量分析。测定对全部Aβ和Aβ42产量的抑制情况。绘制与DAPT浓度相对的抑制百分数,使用 XLfit 软件分析数据，测定药性。

细胞实验

Cell lines: SK-MES-1

Concentrations: 2.5 μM到 160 μM

Incubation Time: 72小时

Method: 细胞接种在96孔板上，使用0.1% DMSO或 DAPT（浓度为2.5 μM-160 μM ）处理72小时。使用MTT染料减少检测实验，稍微修正，测定细胞毒性。与DAPT温育后, 20 μL MTT溶液 (5 mg/mL，溶于 PBS)加到含 180 μL培养基的每孔中，实验板在37 oC下温育4小时，随后每孔加入150 μL DMSO，在室温下震荡15分钟混合。通过酶联免疫吸附法在490 nm处测定吸光值。使用α-MEM 及等量的MTT 溶液和溶剂，作为空白对照。使用PROBIT 程序在SPSS中计算IC50值。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 过表达淀粉样前体蛋白APPV717F 突变型的杂合PDAPP转基因小鼠

Formulation: DAPT溶于玉米油, 5% (v/v) 乙醇中

Dosages: ≤100 mg/kg

Administration: 口服处理

(Only for Reference)

参考文献

[1] Dovey HF, et al. J Neurochem. 2001, 76(1), 173-181.

[2] Cao H, et al. APMIS. 2012, 120(6), 441-450.

[3] Nasoohi S, et al. Neuroscience. 2012, 210, 99-109.

安全信息

产品说明

一般描述

A cell-permeable dipeptide that suppresses Aβ production by blocking γ-secretase (Aβ_total IC₅₀ = 115 nM, Aβ₄₂ IC₅₀ = 200 nM). Prevents Aβ₃₄ generation in murine N2a cells and hAPP/hBACE-1 transfected human HEK 293 cells. Reported to be functionally active in both HEK 293 cells and neuronal cultures without affecting the secretion of amyloid-β precursor protein (APP). Also shown to lower Aβ levels acutely in APP-transgenic mice. Reported to reduce extracellular Aβ plaques and intracellular Aβ accumulation in 3xTgAD transgenic mice. A 25 mM (5 mg/462 µl) solution of γ-Secretase Inhibitor IX (Cat. No. 565784) in DMSO is also available.
A cell-permeable dipeptide that inhibits γ-secretase activity and suppresses Aβ production (Aβ total IC₅₀ = 115 nM; Aβ₄₂ IC₅₀ = 200 nM). Reported to be functionally active in both HEK293 cells overexpressing human APP751 and neuronal cultures, however, it does not affect the secretion of amyloid-b precursor protein (APP). Effective in acutely lowering Ab in APPV717F-transgenic mice. Also effective in inhibiting the production of an ~6 kDa C-terminal cleavage product (CTFg) in HEK293 cells stably transfected with the Swedish mutant, βAPP₆₉₅. Reported to reduce extracellular Aβ plaques and intracellular Aβ accumulation in 3xTgAD transgenic mice.

包装

10 mg in Plastic ampoule
5 mg in Glass bottle
Packaged under inert gas

生化/生理作用

Cell permeable: yes
Product does not compete with ATP.
Reversible: no
Target IC₅₀: 115 nM suppressing Aβtotal production; 200 nM suppressing Aβ42 production

警告

Toxicity: Standard Handling (A)

其他说明

Morohashi, Y., et al. 2006. J. Bio. Chem.Vol. 281, 14670.
Nishitomo, K. et al. 2006 J. Neurochem.99, 1555.
Oddo, S., et al. 2004. Neuron43, 321.
Dovey, H.F., et al. 2001. J. Neurochem.76, 173.
Sastre, M., et al. 2001. EMBO Rep.2, 835.
Vandermeeren, M., et al. 2001. Neurosci. Lett.315, 145.

法律信息

CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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产品性质

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产品说明

包装

5 mg in glass bottle
25 mg in poly bottle

生化/生理作用

DAPT是一种γ-分泌酶抑制剂，间接抑制Notch，即一种γ-分泌酶底物。其他的γ-分泌酶底物包括LDL受体相关蛋白、E-cadherin和ErbB-4。DAPT作为γ-分泌酶的抑制剂，在 β-淀粉样蛋白的形成研究中可能具有重要的应用价值。DAPT在自身免疫性和淋巴增生性疾病的研究中，如阿尔卑斯和红斑狼疮(SLE)，以及在癌细胞生长、血管生成和人类诱导多能干细胞(hIPSC)分化中的作用已被证明可以抑制Notch信号。

特点和优势

该化合物由 Eli Lilly开发。要浏览其他药物开发的化合物和已批准药物/候选药物的列表，请单击此处。
该化合物是神经科学研究的特色产品。点击这里 以发现更多的神经科学特色产品。在sigma.com/discover-bsm 上了解有关生物活性小分子在其他研究领域的更多信息。

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