基本信息

产品描述

LRRK2-IN-1是一种有效的选择性LRRK2抑制剂，对LRRK2 (G2019S)和LRRK2 (WT)的IC50分别为6 nM和13 nM。

靶点（IC50 & Targe）

DCLK1,2.61nM

DCLK2,45nM

LRRK2 (A2016T),2.45μM

LRRK2 (G2019S),6nM

LRRK2 (WT),13nM

体外研究

在稳定表达GFP-LRRK2G2019S的HEK 293细胞中，LRRK2-IN-1改变LRRK2的细胞质定位。在人衍生的成神经细胞瘤SHSY5Y细胞和小鼠Swiss 3T3细胞中，LRRK2-IN-1诱导相似的剂量依赖性Ser910和Ser935去磷酸化，以及14-3-3与内源性LRRK2结合的损失。[1]在表达人R1441C-和G2019S-LRRK2的转基因线虫中，LRRK2-IN1弥补多巴胺受损为特征的行为缺失。[2]在小鼠成纤维细胞中，LRRK2-IN1减少细胞运动性。[3]在AsPC-1和HCT116细胞系，LRRK2-IN-1表现出抗增殖和促凋亡特性，诱导G1和G2/M细胞周期阻滞，并抑制DCLK1 mRNA和蛋白质表达。[4]

体内研究

在野生型雄性C57BL/6小鼠中，LRRK2-IN-1 (100 mg/kg, i.p.)抑制肾脏中LRRK2的Ser910和Ser935去磷酸化，而在大脑中没有影响。[1]

激酶实验

IC50 测定:

活性GST-LRRK2 (1326-2527)，GST-LRRK2 G2019S (1326-2527)，GST-LRRK2 A2016T (1326-2527)和GST-LRRK2 A2016T+G2019S (1326-2527)酶与来自HEK293细胞裂解物的谷胱甘肽琼脂糖纯化36小时，随后瞬时转染合适的cDNA构架。多肽激酶试验重复两次进行，40 µL总体积反应液包含0.5 µg LRRK2激酶(大约为10% 纯度，在50 mM Tris/HCl中终浓度为8 nM)，pH 7.5，0.1 mM EGTA，10 mM MgCl2，20 µM Nictide，0.1 µM γ-32PATP (～500 cpm/pmol)，以及溶于DMSO的指示浓度的抑制剂。在30 °C下培育15分钟后，通过将35 µL反应混合物点样到P81磷酸纤维素纸上终止反应，并将其浸入50 mM磷酸中。将样品充分洗涤，γ-32PATP与Nictide的整合通过Cerenkov计数量化。IC50值通过GraphPad Prism使用非线性回归分析计算。

细胞实验

Cell lines: HCT116，和 AsPC-1 细胞

Concentrations: 20 μM

Incubation Time: 48 h

Method: 细胞以一式三份接种到96孔组织培养板。以DMSO为载体对照，在0，0.31，0.63，1，2，和5，10，和20 μM LRRK2-IN-1存在下进行细胞培育。处理48小时后，10 μL TACS MTT试剂(RND 系统)加入到每孔中，细胞在37°C下培育，直到细胞中出现明显的黑色晶体沉淀。随后将100 μL 266 mM NH4OH的DMSO溶液加入孔中，置于板振荡器上低速振荡1分钟。振荡后，将板避光培育10分钟，每孔的OD550使用酶标仪读取。将得到的结果求平均值，并以DMSO (载体) 对照+/-平均数标准误差的百分比计算。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 野生型雄性 C57BL/6 小鼠

Formulation: Captisol

Dosages: 100 mg/kg

Administration: i.p.

(Only for Reference)

参考文献

[1] Deng X, et al. Nat Chem Biol. 2011, 7(4), 203-205.

[2] Yao C, et al. Hum Mol Genet. 2013, 22(2), 328-344.

[3] Caesar M, et al. Neurobiol Dis. 2013, 54, 280-288.

[4] Weygant N, et al. Mol Cancer. 2014, 13, 103.

安全信息

图形或危害标志
危险说明	H302 H410
防范说明	P264 P270 P273 P301+P312 P330 P391 P501
UN号码	3077
危险分类	9
包装等级	III