黄曲霉毒素B1快速检测试剂盒说明书

(货号：Ounuo98001)

一、原理

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物黄曲霉毒素B1将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗黄曲霉毒素B1抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素B1的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物黄曲霉毒素B1的含量。

二、试剂盒特性

1.灵 敏 度：       0.02ppb

2. 孵育温度：       25℃

3. 孵育时间：       30min～15min

4. 样本检测下限

饲料 大米、玉米、花生、组织、食用油··········· 2 ppb

5. 交叉反应率

黄曲霉毒素B1 - 100%

黄曲霉毒素M1- 6.6%

黄曲霉毒素B2 - 83%

黄曲霉毒素G1 - 107%

黄曲霉毒素G2 - 42%

6.样本回收

饲料 大米、玉米、花生、组织、食用油 ····· 95±35%

三、酶标免疫分析程序:

（1） 测定前应须知：

1、 使用前将需用试剂和板条的温度回升至室温（20～25℃）。

2、 使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。

3、 在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。

4、 所有恒温孵育过程，避免光线照射，用盖板膜盖住微孔板。

(2) 操作步骤：

1、 从2～8℃冷藏环境中取出所需试剂，室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、 取出框架及需要数量的微孔，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。

3、 配液：将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。

4、 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5、 加标准品/样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗体工作液，用盖板膜盖板，轻轻振荡混匀，25℃环境反应30min。

6、 将孔内液体甩干，用稀释后的洗涤液250µl/孔洗板4～5次，每次间隔15～30秒，用吸水纸拍干（拍干后未清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

7、 显色：加入底物A液50µl/孔，再加入底物B液50µl/孔，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显色15min。

8、 测定：加入终止液50µl/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，5min内读数），测定每孔OD值。