细胞介绍

DC2.4是通过用表达鼠粒细胞-巨噬细胞CSF (GM-CSF)和myc和raf癌基因的逆转录病毒载体转导C57BL/6小鼠的骨髓分离物而产生的永生化鼠树突细胞。DC2.4表现出树突细胞的特征，包括细胞形态和树突细胞特异性标记的表达，以及吞噬和呈递MHC类和II类分子上的外源性抗原的能力。树突细胞(DC)是免疫系统的抗原呈递细胞，在大多数组织中发现，特别是那些与外部环境接触的组织(例如，皮肤和鼻、肺、胃和肠的内层)。最早于1973年描述，树突状细胞的主要功能之一是吞噬外来病原体，并将加工后的抗原呈递至幼稚T细胞，以调节适应性免疫反应。树突状细胞还表达Toll样受体，并帮助调节先天免疫反应。尽管它们分布在大多数组织中，但DC在体内数量很少，并且在体外难以维持。这些困难限制了树突细胞的研究。

细胞特性

1） 来源：C57BL/6小鼠 骨髓

2） 形态：上皮样   贴壁和贴壁不牢（半贴壁半悬浮)混合生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5）用途：仅供科研使用。

一．培养基及培养冻存条件准备

1） 准备RPMI-1640（推荐iCell-0002）培养基；优质胎牛血清，10%；添加10ng/mL murine GM-CSF；双抗，1%。

注意：该细胞传代时先收集离心悬浮细胞，剩下的贴壁细胞用胰酶消化时间比较长，且很难消化下来。建议用无菌细胞刮刮拭培养表面将细胞刮落，收集离心后同收集的悬浮细胞一起重悬接种到新的培养瓶中。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

该细胞为贴壁和轻微的贴壁（半贴壁半悬浮）细胞，传代可以参考以下方法：

1. 收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（该贴壁细胞比较难消化，建议用细胞刮刀刮拭培养表面将细胞刮落，收集离心后同收集的悬浮细胞一起重悬接种到新的培养瓶中），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3. 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化（建议细胞刮刀刮拭）下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3） 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。