样本采集与预处理

定义

样本预处理是指对采集的生物样本(如血清、血浆、组织匀浆、细胞上清等)进行离心、稀释或保存处理，以确保检测结果的准确性。

关键事实

适用样本类型：血清、血浆(EDTA/肝素抗凝)、细胞上清、组织匀浆、尿液等(资料2)。

处理方式：

血清：3000转/分钟离心10分钟分离；

组织匀浆：加入生理盐水捣碎；

保存建议：-20℃分装保存，避免反复冻融(资料1)。

样本稀释：部分样本需用稀释液按比例稀释后再加样(如10μL样本+40μL稀释液)。

争议与讨论

样本来源差异：不同组织或物种来源的样本可能影响抗体识别效率，需验证交叉反应性。

样本保存时间：长期保存可能影响蛋白稳定性，建议在3个月内完成检测。

实验操作流程设计

定义

实验操作流程是指从加样、孵育、洗板到显色、终止和读数的完整ELISA检测步骤。

关键事实

标准操作流程(资料1)：

设置标准品孔、样本孔、空白孔；

加入标准品50μL/孔，样本10μL+稀释液40μL；

加入HRP标记检测抗体100μL/孔，37℃孵育60分钟；

洗板5次(手动或自动洗板机)；

加入底物A/B各50μL，37℃避光孵育15分钟；

加终止液50μL，15分钟内于450nm波长读取OD