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细胞简介：小鼠骨骼肌细胞分离自四肢肌肉组织；骨骼肌又称横纹肌，肌肉中的一种，约占全身重量的40%。骨骼肌纤维为长柱形的多核细胞，肌膜的外面有基膜紧密贴附。属于横纹肌，横纹肌还包括心肌与内脏横纹肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每块肌肉都是具有一定形态、结构和功能的器官，有丰富的血管、淋巴分布，在躯体神经支配下收缩或舒张，进行随意运动。肌肉可根据共形状、大小、位置、起止点、纤维方向和作用等命名。依形态命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨状肌等。骨骼肌细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方。肌细胞内有许多沿细胞长轴平行排列的细丝状肌原纤维。每一肌原纤维都有相间排列的明带(Ⅰ带)及暗带(A带)。明带染色较浅，而暗带染色较深。暗带中间有一条较明亮的线称H线。H线的中部有一M线。明带中间，有一条较暗的线称为Z线。两个Z线之间的区段，叫做一个肌节。骨骼肌细胞也称横纹肌细胞，细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方，细胞多呈梭行，具有一定的方向性。骨骼肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态：大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。

方法简介：实验室分离的小鼠骨骼肌细胞采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的小鼠骨骼肌细胞经α-Sarcomeric actin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件PLL(0.1mg/ml)

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3-5代左右

消化液：0.25%胰蛋白酶小鼠骨骼肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。
培养技术规范

基础培养基选择需根据细胞类型选用专用配方，如肝细胞培养基含10%胎牛血清和生长因子。培养条件统一设置为37℃、5% CO₂环境，湿度维持在70%-80%。传代操作需在80-90%融合度时进行，使用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化1-3分钟，以1:2至1:5比例分瓶。冻存标准采用90%血清+10%DMSO冻存液，程序降温后液氮保存。

质量控制体系

所有原代细胞需通过三项核心检测：

病原体检测：排除HIV-1、HBV、HCV及支原体污染

纯度验证：通过细胞特异性标志物免疫染色（如肝细胞检测白蛋白表达）

活性评估：复苏后活细胞率≥80%，贴壁率≥70% 每批次细胞需提供包含上述数据的质量分析报告。

原代细胞培养注意事项

无菌操作：全程在超净工作台内进行，实验人员需穿戴无菌手套、口罩、实验服，避免细菌、真菌污染。

培养基选择：不同类型的原代细胞对培养基成分要求差异较大，需严格按照细胞说明书选择专用培养基，避免随意更换。

消化时间控制：酶消化时间过长会导致细胞损伤甚至死亡，过短则细胞分离不充分，需通过显微镜观察细胞形态变化，及时终止消化。

传代时机：当细胞融合度达到80%-90%时进行传代，避免细胞过度融合导致接触抑制，影响细胞活性。

冻存与复苏：原代细胞冻存时需缓慢降温（如采用程序降温盒），复苏时快速解冻（37℃水浴1-2分钟），并及时离心去除冻存液中的DMSO，减少细胞毒性。

运输与接收处理

提供两种运输方案：

冻存运输：干冰保温（-80℃可保存1个月），接收后需立即复苏或转入液氮

活细胞运输：T25培养瓶常温运输，接收后静置2-4小时观察贴壁情况 异常需在收到后72小时内反馈，并提供细胞状态照片（100X和200X各一张）。

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