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细胞简介：小鼠睾丸支持细胞分离自睾丸；睾丸支持细胞又称Sertoli细胞，在体内呈不规则的高锥体形，细胞基部附着在基膜上，顶部伸至曲精小管腔面。它是生精细胞的支架，为其提供必需的营养物质，能合成与分泌雄激素结合蛋白，为其提供高浓度的雄激素环境等，还具有构成血-睾屏障，形成睾丸内微环境，调节精子发生等功能。睾丸支持细胞是睾丸的主要组成细胞，能分泌多种生长因子和免疫抑制因子，不仅可为精子提供营养支持和免疫保护，也能对其他细胞，如胰岛和神经细胞提供营养支持，而且当其与胰岛或神经细胞共移植时，也能够为这些细胞提供免疫保护，提高植活率。因此，睾丸支持细胞在细胞移植中具有广泛的应用前景。制备高活率的Sertoli不仅对Sertoli的基础研究有重要价值，而且在精子发生等领域有重要意义。

方法简介：实验室分离的小鼠睾丸支持细胞采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的小鼠睾丸支持细胞经Fas-L免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%胰蛋白酶小鼠睾丸支持细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。
细胞质量检测

活率检测：采用台盼蓝染色法，活细胞拒染，死细胞被染成蓝色，活率应≥90%。

纯度鉴定：通过免疫荧光染色、流式细胞术等方法，检测细胞特异性标志物，确保细胞纯度≥95%。

生物学功能检测：根据细胞类型进行相应功能检测，如肝细胞的白蛋白分泌功能、免疫细胞的增殖与杀伤功能等。

培养条件与培养基配置

推荐使用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基（或MEM培养基），添加青霉素-链霉素双抗。培养条件为37℃、5% CO₂及70%-80%湿度环境，气相成分为95%空气和5%二氧化碳。冻存液需现配现用（90%血清+10%DMSO），液氮保存。细胞传代周期为2-3天，消化时采用0.25%胰蛋白酶-EDTA，传代比例建议1:2至1:5。

细胞处理操作规范

复苏：将冻存管37℃水浴快速解冻，离心后弃上清，用培养基重悬并接种至培养瓶，次日换液；

传代：80%-90%融合度时消化，离心后按比例分瓶；

冻存：生长状态良好时收集细胞，冻存密度不低于1×10⁶/ml。运输可选择冻存管干冰运输或T25培养瓶常温运输，后者需观察贴壁率并及时传代。

质量控制与应用领域

细胞需通过形态学（梭形贴壁生长）和标志物（波形蛋白阳性）双重验证，提供配套鉴定报告。在研究中可用于：

体外药物模型评估（如COPD模型中结缔组织生长因子CTGF的高表达分析）；

基因功能调控（特定基因敲除或过表达实验）；

分子机制研究（如RNA剪接、Western Blot等）。注意仅限科研用途，禁止临床应用。

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