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细胞简介：兔膀胱平滑肌细胞分离自膀胱组织；膀胱是主要由平滑肌细胞组成的中空器官，膀胱平滑肌的舒张和收缩使得膀胱分别储存和排出尿液。膀胱平滑肌细胞表型的调控和可诱导一氧化氮合酶的表达与多种病理状况有关，包括膀胱功能障碍。研究表明，组织缺氧抑制膀胱平滑肌细胞的增殖，膀胱平滑肌细胞的分化依赖于膀胱上皮细胞释放的因子。膀胱平滑肌细胞外基质的分泌表型可通过细胞所经历的机械变形频率而改变。平滑肌是许多疾病中的共同路径，因此，了解在疾病发生及持续过程中平滑肌怎样变化，这是治疗方法取得进展的重要一步。膀胱壁由三层组织组成，由内向外为粘膜层，肌层和外膜。逼尿肌为膀胱壁层肌肉的总称，由平滑肌构成。分为三层，内、外层为纵行肌，中层为环形肌。环状肌最厚，坚强有力。逼尿肌收缩，可使膀胱内压升高，压迫尿液由尿道排出。在膀胱与尿道交界处有较厚的环形肌，形成尿道内括约肌。在括约肌收缩能关闭尿道内口，防止尿液自膀胱漏出。膀胱平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态：大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。体外培养膀胱平滑肌细胞不仅为组织工程膀胱、尿道提供种植细胞的必要手段，也是研究平滑肌瘤的基础与前提。

方法简介：实验室分离的兔膀胱平滑肌细胞采用胰蛋白酶 - 胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的兔膀胱平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传5代左右；3代以内状态**

消化液：0.25%胰蛋白酶兔膀胱平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。
培养关键参数

培养基 含FBS、生长添加剂、青霉素/链霉素的专用内皮细胞培养基

培养条件 气相：空气95% + CO₂ 5%，温度37℃

换液频率 每2-3天换液一次

传代特性 可传2-3代（不同来源显示2-3代或18代以上，可能因培养方法差异）

消化液 0.25%胰蛋白酶

包被条件 PLL（0.1mg/ml）或明胶（0.1%）

细胞的制备流程

组织取材：从活体动物或新鲜手术标本中获取目标组织，取材过程需严格无菌操作，尽量缩短组织暴露时间

组织处理：通过机械剪切、酶消化（常用胰蛋白酶、胶原酶）等方式将组织分散成单细胞悬液

细胞分离：利用过滤、离心等方法去除细胞碎片和杂质，获得纯化的单细胞群体

接种培养：将细胞接种到含特定培养基的培养容器中，置于37℃、5%CO₂的培养箱中培养

关键操作要点

细胞复苏

快速解冻：37℃水浴中摇晃冻存管至完全融化

离心洗涤：1000 RPM离心4分钟，弃上清后用培养基重悬

培养维护

贴壁细胞：汇合度达80%-90%时传代，使用胰酶消化（如0.25% Trypsin-EDTA）

悬浮细胞：定期换液，避免密度过高导致营养耗尽

冻存保护

冻存液配方：推荐10% DMSO + 90% 完全培养基，现用现配

程序降温：-80℃冰箱过夜后转入液氮长期保存

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