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细胞简介：兔卵巢颗粒细胞分离自卵巢组织；卵巢是雌性动物的生殖器官，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同，仅左侧发育（右侧已退化），呈葡萄状，均为处于不同发育时期的卵泡，卵泡呈黄色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小与年龄和产卵期有关。大多数脊椎动物有两个卵巢，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管、淋巴管和神经。卵巢颗粒细胞是卵巢的主要功能细胞，其增殖与分化直接影响着卵泡的生长启动、发育、排卵、黄体形成以及甾体激素分泌等卵巢功能活动。卵巢颗粒细胞是卵泡内的最大细胞群，也是主要的功能细胞，卵泡发育的显著标志之一就是颗粒细胞迅速生长及增殖，而成年动物的卵泡闭锁主要是由颗粒细胞凋亡引起，尤其在卵泡发育后期，此外，颗粒细胞还与卵泡膜细胞共同完成卵巢激素的合成，维持着有利于卵母细胞生长和成熟的微环境。细胞形状呈圆形或椭圆形。

方法简介：实验室分离的兔卵巢颗粒细胞采用先机械分离，而后胶原酶消化，最后差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的兔卵巢颗粒细胞经FSHR免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件PLL（0.1mg/ml）

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性：可传1-2代

消化液：0.25%胰蛋白酶兔卵巢颗粒细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。
培养技术规范

基础培养基选择需根据细胞类型选用专用配方，如肝细胞培养基含10%胎牛血清和生长因子。培养条件统一设置为37℃、5% CO₂环境，湿度维持在70%-80%。传代操作需在80-90%融合度时进行，使用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化1-3分钟，以1:2至1:5比例分瓶。冻存标准采用90%血清+10%DMSO冻存液，程序降温后液氮保存。

质量控制体系

所有原代细胞需通过三项核心检测：

病原体检测：排除HIV-1、HBV、HCV及支原体污染

纯度验证：通过细胞特异性标志物免疫染色（如肝细胞检测白蛋白表达）

活性评估：复苏后活细胞率≥80%，贴壁率≥70% 每批次细胞需提供包含上述数据的质量分析报告。

原代细胞培养注意事项

无菌操作：全程在超净工作台内进行，实验人员需穿戴无菌手套、口罩、实验服，避免细菌、真菌污染。

培养基选择：不同类型的原代细胞对培养基成分要求差异较大，需严格按照细胞说明书选择专用培养基，避免随意更换。

消化时间控制：酶消化时间过长会导致细胞损伤甚至死亡，过短则细胞分离不充分，需通过显微镜观察细胞形态变化，及时终止消化。

传代时机：当细胞融合度达到80%-90%时进行传代，避免细胞过度融合导致接触抑制，影响细胞活性。

冻存与复苏：原代细胞冻存时需缓慢降温（如采用程序降温盒），复苏时快速解冻（37℃水浴1-2分钟），并及时离心去除冻存液中的DMSO，减少细胞毒性。

运输与接收处理

提供两种运输方案：

冻存运输：干冰保温（-80℃可保存1个月），接收后需立即复苏或转入液氮

活细胞运输：T25培养瓶常温运输，接收后静置2-4小时观察贴壁情况 异常需在收到后72小时内反馈，并提供细胞状态照片（100X和200X各一张）。

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