细胞简介

小鼠脾淋巴细胞分离自脾脏组织；脾脏是机体***免疫器官，占全身淋巴组织总量的25%，含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞，是机体细胞免疫和体液免疫的中心。位于左季肋区后外方肋弓深处，与9－11肋相对，长轴与第10肋一致。膈面与膈肌和左肋膈窦相邻，前方有胃，后方与左肾、左肾上腺毗邻，下端与结肠脾沟相邻，地柔软的网状内皮细胞器官。淋巴细胞(lymphocyte)白细胞的一种，由淋巴器官产生，机体免疫应答功能的重要细胞成分。淋巴器官根据其发生和功能的差异，可分为中枢淋巴器官(又名初级淋巴器官)和周围淋巴器官(又名次级淋巴器官)两类。前者包括胸腺、腔上囊或其相当器官(有人认为在哺乳动物是骨髓)。它们无须抗原刺激即可不断增殖淋巴细胞，成熟后将其转送至周围淋巴器官。后者包括脾、淋巴结等。成熟淋巴细胞需依赖抗原刺激而分化增殖，继而发挥其免疫功能。

方法简介：实验室分离的小鼠脾淋巴细胞采用机械研磨法结合密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的小鼠脾淋巴细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：悬浮

细胞形态：圆形

传代特性：不增殖；不传代

消化液：0.25%胰蛋白酶小鼠脾淋巴细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。

材料与试剂准备

实验器材：无菌培养皿、移液管、离心管、CO₂培养箱、超净工作台、倒置显微镜、离心机等，所有器材需提前灭菌处理。

基础试剂：

细胞培养基：根据细胞类型选择专用培养基，如DMEM、RPMI-1640、MEM等，部分细胞需添加血清（胎牛血清FBS、新生牛血清NBS）或无血清替代物。

消化液：常用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，用于组织解离；对于某些敏感细胞，可选用胶原酶、透明质酸酶等。

缓冲液：PBS（磷酸盐缓冲液）、Hanks平衡盐溶液（HBSS），用于冲洗组织和细胞。

其他：抗生素（青霉素、链霉素）、抗真菌剂（两性霉素B）、细胞冻存液（含10% DMSO和90%血清）。

原代细胞分离与培养流程

1. 组织样本处理

取材：从新鲜动物或人体组织中获取样本，操作需在无菌环境下进行，尽量缩短样本暴露时间。

清洗：用含抗生素的PBS反复冲洗组织，去除血液、脂肪等杂质。

剪碎：将组织剪成1-2mm³的小块，便于后续消化。

2. 细胞解离

酶消化法：将组织块加入消化液，37℃水浴孵育，期间轻轻摇晃，根据组织类型调整消化时间（通常15-60分钟）。

机械法：对一些难以酶解的组织，可采用研磨、过筛等方式分离细胞，但需注意避免过度机械损伤。

终止消化：加入含血清的培养基，中和消化酶活性，随后用滤网过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片。

3. 细胞接种与培养

离心收集：将过滤后的细胞悬液离心（1000-1500rpm，5-10分钟），弃上清，用培养基重悬细胞。

细胞计数：使用血细胞计数板或细胞计数仪测定细胞浓度，调整至合适的接种密度（通常1×10⁵-1×10⁶ cells/mL）。

培养条件：将细胞接种于培养瓶/皿中，置于37℃、5% CO₂、湿度95%的培养箱中培养，根据细胞类型定期更换培养基。
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