细胞简介

小鼠角膜上皮细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。其主要功能如下：①角膜是**的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能，分三层细胞层，外层即是上皮细胞；②角膜上皮细胞能参与先天性免疫，能感应病原体存在并发出信号从而激活角膜防御系统；③角膜上皮细胞能高效表达醛脱氢酶。角膜上皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段，常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和药物对细胞生长的影响。

方法简介：实验室分离的小鼠角膜上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的小鼠角膜上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2)

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性：可传1-2代

消化液：0.25%胰蛋白酶小鼠角膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。

分离与培养流程

组织处理：无菌获取组织后，用PBS清洗并剪碎至1mm³大小；

酶消化：胶原酶/胰酶混合消化（37℃, 10-20分钟），离心收集细胞悬液；

纯化：密度梯度离心或差速贴壁法去除杂细胞（如红细胞、成纤维细胞）；

接种培养：使用组织特异性培养基（如肝细胞专用培养基含生长因子），在37℃、5% CO₂条件下培养。

质量控制标准

纯度验证：免疫荧光检测细胞特异性标志物；

无菌检测：排除HIV-1、HBV、HCV、支原体等污染；

活力要求：复苏后存活率≥80%，贴壁率≥70%；

批次一致性：提供细胞计数、活力检测及功能验证报告（如代谢酶活性）。

运输与保存

运输形式：

冻存管（干冰运输，含冻存液：90%血清+10% DMSO）；

培养瓶（常温运输，培养基充满至瓶口）。

保存条件：

液氮（长期，≤-150℃）；

-80℃（短期，≤1个月）。

注：收到细胞需立即检查包装完整性并记录状态。
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