细胞简介

小鼠脊髓成纤维细胞分离自脊髓组织；脊髓是细细的管束状的神经结构，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护；是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分，在椎管里面，上端连接延髓，两旁发出成对的神经，分布到四肢、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形(蝴蝶型)灰质区，主要由神经细胞构成；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成；脊髓是许多简单反射的中枢。脊髓两旁发出许多成对的神经(称为脊神经)分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官。脊髓是周围神经与脑之间的通路，也是许多简单反射活动的低级中枢。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的脊髓成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。脊髓成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持组织的正常形态；合成和释放细胞外基质；组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。

方法简介：实验室分离的小鼠脊髓成纤维细胞采用胰蛋白酶 - 胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的小鼠脊髓成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%胰蛋白酶小鼠脊髓成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。

培养关键参数

培养基 含FBS、生长添加剂、青霉素/链霉素的专用内皮细胞培养基

培养条件 气相：空气95% + CO₂ 5%，温度37℃

换液频率 每2-3天换液一次

传代特性 可传2-3代（不同来源显示2-3代或18代以上，可能因培养方法差异）

消化液 0.25%胰蛋白酶

包被条件 PLL（0.1mg/ml）或明胶（0.1%）

细胞的制备流程

组织取材：从活体动物或新鲜手术标本中获取目标组织，取材过程需严格无菌操作，尽量缩短组织暴露时间

组织处理：通过机械剪切、酶消化（常用胰蛋白酶、胶原酶）等方式将组织分散成单细胞悬液

细胞分离：利用过滤、离心等方法去除细胞碎片和杂质，获得纯化的单细胞群体

接种培养：将细胞接种到含特定培养基的培养容器中，置于37℃、5%CO₂的培养箱中培养

关键操作要点

细胞复苏

快速解冻：37℃水浴中摇晃冻存管至完全融化

离心洗涤：1000 RPM离心4分钟，弃上清后用培养基重悬

培养维护

贴壁细胞：汇合度达80%-90%时传代，使用胰酶消化（如0.25% Trypsin-EDTA）

悬浮细胞：定期换液，避免密度过高导致营养耗尽

冻存保护

冻存液配方：推荐10% DMSO + 90% 完全培养基，现用现配

程序降温：-80℃冰箱过夜后转入液氮长期保存
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