细胞简介

人肠微血管内皮细胞分离自肠道组织；肠道指的是从胃幽门至肛门的消化管。肠是消化管中最长的一段，也是功能最重要的一段。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠3大段。大量的消化作用和几乎全部消化产物的吸收都是在小肠内进行的，大肠主要浓缩食物残渣，形成粪便，再通过直肠经肛门排出体外。肠道堪称身体最劳累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足够的养分，其实它的功能还远不止此——它还是机体内***微生态系统。微血管是极细微的血管，管径平均为6-9μm，连于动、静脉之间，互相连接成网状。微血管壁薄，管径较小，血流很慢，通透性大。其功能是利于血液与组织之间进行物质交换。其管壁主要由一层内皮细胞构成，在内皮外面有一薄层结缔组织。另外还常可见到一种扁而有突起的细胞贴在微血管的管壁外面，称为周细胞。

方法简介：实验室分离的人肠微血管内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的人肠微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件PLL（0.1mg/ml）或明胶（0.1%）

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%胰蛋白酶人肠微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。

核心操作流程

复苏 冻存管37℃水浴迅速解冻，加入培养基离心（1000 RPM，4分钟），弃上清后重悬接种。

培养 贴壁细胞需用PBS润洗，0.25%胰酶消化1-2分钟，终止后按1:2传代；悬浮细胞直接离心分瓶，推荐使用专用培养基（如LONZA X-VIVO15系列）。

冻存 取对数期细胞，用含10%DMSO的冻存液（血清:培养基=1:9）重悬，密度≥1×10⁶/ml，程序降温后转入液氮。

细胞处理指南

接收与初步检查：

75%酒精消毒培养瓶外壁，观察培养基颜色及细胞密度。

显微镜下拍照记录（100X、200X）。

贴壁细胞传代：

吸弃旧培养基，PBS轻柔洗涤。

0.05%胰酶-EDTA消化至细胞变圆，加入终止液终止反应。

离心（1000rpm, 5min）后重悬，接种至新培养瓶（37℃, 5% CO₂）。

悬浮细胞处理：

直接离心收集细胞，更换新鲜培养基后继续培养。

注意事项

质量控制：细胞传代比例建议1:2至1:3，避免过度消化。

污染预防：严格无菌操作，定期检测支原体。

代次限制：原代细胞建议使用前5代，以保持功能稳定性。
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