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增强型BCA蛋白定量试剂盒
增强型BCA蛋白定量试剂盒图片
型号: PD-BCA-E2
品牌: 炎熙生物
参考价格: 488元/盒
包装: 125ml
交货期: 2-3天
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1506
型号:PD-BCA-E2
品牌:炎熙生物
参考价格:488
交货期:2-3天
产品别名:BCA试剂盒
BCA法测蛋白浓度
产品介绍

增强型BCA蛋白定量试剂盒

Enhanced Bicinchoninic Acid Kit for Protein Determination

 

货号                   组份A        组份B       组份C       BSA标准品            规格

PD-BCA-E2        63 ml         60 ml         3 ml        1 X 1 ml           可供120个试管, 或8块96孔板测试用。

PD-BCA-E          250 ml      240 ml       12 ml        4 X 1 ml          可供480个试管,或32块96孔板测试用。

 

BSA标准品为5 mg/ml BSA,溶于水中,含0.05%叠azide氮钠。

 

室温运输和储存。如因温度低或长时间放置出现沉淀,将其摇匀即可使用。BSA标准品保存在-20度,如出现微生物污染则应丢弃。

 

BCA蛋白定量试剂盒技术背景与原理详解

BCA(Bicinchoninic Acid,二喹啉甲酸)蛋白定量法是一种基于铜离子氧化还原反应的比色检测技术,其核心技术原理涉及蛋白质的还原特性与铜离子的配位化学。该方法通过巧妙的反应设计,实现了对蛋白质浓度的高灵敏度、高特异性检测,现已成为生命科学领域最常用的蛋白定量方法之一。

 

BCA法的检测原理建立在两个关键化学反应的基础上:

**阶段:蛋白质介导的铜离子还原

在碱性环境(pH 11-12)下,蛋白质分子中的特定结构能够将二价铜离子(Cu²⁺)还原为一价铜离子(Cu⁺)。这一还原过程主要依赖于蛋白质中的两类结构:

肽键骨架:在强碱条件下,蛋白质主链的肽键氮原子能够提供电子,参与铜离子还原。

还原性氨基酸侧链:半胱氨酸(Cys)的巯基(-SH)、色氨酸(Trp)的吲哚环、酪氨酸(Tyr)的酚羟基等具有强还原性的氨基酸残基,能够高效地将Cu²⁺还原为Cu⁺。

**阶段:BCA-Cu⁺螯合物的形成

还原生成的Cu⁺立即与溶液中的BCA分子形成稳定的2:1螯合物(每个Cu⁺离子与两个BCA分子配位)。这种复合物具有独特的电子结构,其最高占据分子轨道(HOMO)与最低未占分子轨道(LUMO)之间的电子跃迁在562 nm处产生强吸收峰,呈现典型的紫红色。值得注意的是,该复合物的摩尔消光系数高达7,000-15,000 M⁻¹cm⁻¹,这是BCA法高灵敏度的结构基础。

 BCA法的显色动力学呈现典型的两阶段特征:快速起始期(0-5分钟,由游离氨基酸主导)和缓慢平台期(5-30分钟,由肽键主导)。通过调节孵育温度(37℃或60℃)可以加速反应达到平衡。研究发现,在60℃下反应5分钟即可达到37℃30分钟的显色强度,这归因于阿伦尼乌斯定律描述的温度-反应速率关系。

 

BCA法的检测灵敏度直接取决于两个分子特性:

蛋白质还原当量

不同蛋白质的BCA反应性存在显著差异,这主要取决于其"还原当量"(Reducing Equivalent)——即单位质量蛋白质能够还原的Cu²摩尔数。例如:

牛血清白蛋白(BSA):每分子含21个还原性氨基酸(6Cys+11Tyr+4Trp),还原当量为0.85

溶菌酶:每分子仅含8个还原性氨基酸(8Cys+3Tyr+6Trp),还原当量为0.62

这种差异导致不同蛋白质的标准曲线斜率可能相差达30%,因此**定量时必须使用同源标准品。

尽管BCA法具有诸多优势,但仍存在一些本质性局限:

高浓度还原剂(如DTT>5mM)会直接还原Cu²⁺,导致假阳性。

不同蛋白类型的响应差异。

 

本产品仅供研究使用。


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