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超氧阴离子清除能力检测试剂盒(微量法)
超氧阴离子清除能力检测试剂盒(微量法)图片
包装: 100管/96样
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产品介绍

超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基,可攻击生物大分子,如脂质、蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等,使其交链或者断裂,引起细胞结构和功能的破坏,与机体衰老和病变有很密切的关系,清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。

AP-TEMED系统产生超氧阴离子,与盐酸羟胺反应生成NO2-,NO2-与对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用生成红色的偶氮化合物,在530nm处有特征吸收峰,样品对超氧阴离子的清除能力与530nm的吸光值呈负相关。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容:

试剂名称规格保存条件
提取液液体100ml×1瓶2-8℃
试剂一液体1.5ml×1瓶2-8℃,避光
试剂二粉剂×1瓶2-8℃,避光
试剂三液体7.5ml×1瓶2-8℃
试剂四液体7.5ml×1瓶2-8℃,避光
试剂五液体7.5ml×1瓶2-8℃,避光

溶液的配制:

1.试剂二临用前临用前加6ml蒸馏水充分溶解。

需自备的仪器和用品:

天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

操作步骤:

一、样品处理

1.组织:按照质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1ml提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

2.细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

3.培养液或其它液体:直接检测。

4.粉剂药物可配制成相同浓度,比如1mg/ml。

二、测定操作


空白管对照管测定管
试剂一(μL)101010
试剂二(μL)-4040
H2O(μL)6525-
充分混匀,25℃反应1min
样品(μL)--25
试剂三(μL)505050
充分混匀,37℃反应30min
试剂四(μL)505050
试剂五(μL)505050
充分混匀,37℃显色20min,于微量石英比色皿/96孔板,以空白管调零,在530nm处测定对照管和测定管的吸光值,分别记为A对照管和A测定管。

注意:空白管只需测定一次。

三、计算公式

超氧阴离子清除率I%=(A对照管-A测定管)/ A对照管×100%

注意事项:

1.试剂一4℃可保存2个月,配制好的试剂二4℃可保存一周,建议实验前配制,并尽快使用。

2.样品处理完后立即进行测定,或者低温保存不超过24小时。

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