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细胞简介 鸡卵泡颗粒细胞分离自鸡卵泡组织；成熟卵泡是卵巢的组织结构成分之一，卵泡腔很大，卵丘很明
显。卵泡内膜细胞紧靠卵泡颗粒层，与颗粒层细胞之间有一层基膜相隔，内膜细胞呈多边形，胞质清亮，胞
核圆形，细胞间可见许多毛细血管，外膜细胞位于最外层，多呈梭形，与周围结缔组织分界不明显。卵泡
（follicle）中卵母细胞四周有一层菱形或扁平细胞围绕，在卵泡开始发育、卵细胞成长的同时，周围的菱形
细胞变为立方形，并由单层增生成复层，因其细胞浆内含有颗粒，故称为颗粒细胞。初级卵泡的颗粒细胞为单
层；次级卵泡的颗粒细胞增至复层；成熟卵泡的颗粒细胞展开又变为单层。颗粒细胞的胞核大而圆，着色深，
细胞的游离面有许多细长突起伸入放射带的凹陷部。

方法简介 实验室分离的鸡卵泡颗粒细胞采用先机械分离后胶原酶-胰蛋白酶联合消化法、并通过专用培养基培
养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

质量检测 实验室分离的鸡卵泡颗粒细胞经FSHR免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、
HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

自备试剂： 0.25%胰蛋白酶、PBS、完全培养基

培养基： 鸡卵泡颗粒细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等) 

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

鸡卵泡颗粒细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细
胞的培养状态。

培养方法：

　① 组织块培养法

　组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养
瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

　② 消化培养法

　③ 悬浮细胞培养法

　对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，
可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

　④器官培养

　器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养
可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调
节作用。

操作步骤：

一、细胞复苏与培养

1‌.复苏步骤‌：

从液氮或-80℃取出细胞，立即放入37℃水浴中快速解冻。

用1.75%酒精棉球擦拭细胞瓶外部，放入37℃培养箱预热3-4小时。

显微镜下观察细胞状态，若密度低则补加5-6ml预热培养基。

‌培养条件‌：

‌培养基‌：M199完全培养基（含10%FBS、1%双抗）。

‌环境‌：37℃、5%CO₂，每2-3天换液一次。

二、传代操作

‌2.消化与接种‌：

吸出旧培养基，用PBS清洗细胞。

加入0.125%胰蛋白酶消化3min，显微镜下观察细胞回缩变圆后终止消化。

按1:2或1:3比例接种，补加5ml完全培养基。

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