抑癌基因p14重组兔单抗

商品属性

产品介绍
英文名称CDKN2A/p14ARF Recombinant Rabbit mAb

中文名称抑癌基因p14重组兔单抗

别    名ARF_HUMAN; Tumor suppressor ARF; Alternative reading frame; ARF; Cyclin-dependent kinase inhibitor 2A; CDKN2 ; MLM;  

研究领域肿瘤  细胞生物  免疫学  染色质和核信号  干细胞  细胞周期蛋白  转录调节因子  

抗体来源Rabbit

克隆类型Recombinant

克 隆 号F2K1

交叉反应Human

产品应用WB=1:500-2000,ICC/IF=1:100-500

not yet tested in other applications.

optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

理论分子量14 kDa

检测分子量

细胞定位细胞核 细胞浆

性    状Liquid

浓    度1mg/ml

免 疫 原KLH conjugated synthetic peptide derived from human P14ARF

亚    型IgG

纯化方法affinity purified by Protein A

缓 冲 液0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存条件Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

注意事项This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

PubMedPubMed

产品介绍This gene generates several transcript variants which differ in their first exons. At least three alternatively spliced variants encoding distinct proteins have been reported, two of which encode structurally related isoforms known to function as inhibitors of CDK4 kinase. The remaining transcript includes an alternate first exon located 20 Kb upstream of the remainder of the gene; this transcript contains an alternate open reading frame (ARF) that specifies a protein which is structurally unrelated to the products of the other variants. This ARF product functions as a stabilizer of the tumor suppressor protein p53 as it can interact with, and sequester, the E3 ubiquitin-protein ligase MDM2, a protein responsible for the degradation of p53. In spite of the structural and functional differences, the CDK inhibitor isoforms and the ARF product encoded by this gene, through the regulatory roles of CDK4 and p53 in cell cycle G1 progression, share a common functionality in cell cycle G1 control. This gene is frequently mutated or deleted in a wide variety of tumors, and is known to be an important tumor suppressor gene. [provided by RefSeq, Sep 2012].

靶点与功能

p14ARF（Alternative Reading Frame）是CDKN2A基因通过选择性阅读框编码的抑癌蛋白，分子量约14kDa，含132个氨基酸。其核心功能包括：

通路调控：与MDM2结合并抑制其泛素化活性，稳定p53蛋白（通过阻止p53降解），激活G1期细胞周期阻滞或凋亡；

肿瘤关联：在肺癌（40%）、胰腺癌（35%）、胶质母细胞瘤（50%） 中高频缺失，是p53通路失活的重要机制（独立于p16INK4a）；

研究价值：用于验证“ARF-MDM2-p53”轴在癌基因诱导的细胞衰老中的作用，或作为预后标志物（如舌癌中低表达提示生存期缩短）。

实验操作关键要点

WB检测（A549细胞裂解液）：

样本制备：使用含1mM PMSF的RIPA裂解液冰上裂解30分钟，12000g离心15分钟取上清（p14ARF半衰期短，建议添加蛋白酶抑制剂）；

电泳条件：15% SDS-PAGE凝胶（小分子量蛋白分离），恒压80V浓缩胶、120V分离胶，转膜采用0.22μm PVDF膜（200mA恒流45分钟）；

抗体孵育：一抗1:1500稀释（5% BSA+TBST），4℃孵育过夜，HRP二抗（山羊抗兔）1:5000室温孵育1小时，曝光时间30-60秒（条带易被背景掩盖，建议设置阴性对照）。

IHC-P组织染色（肺癌石蜡切片）：

抗原修复：采用EDTA缓冲液（pH9.0） 高压修复3分钟（针对福尔马林固定导致的表位遮蔽）；

阳性定位：细胞核呈棕黄色颗粒状阳性（胞质着色为非特异性），正常肺组织肺泡上皮弱阳性，癌组织中因缺失呈阴性；

对照设置：必须包含p14ARF野生型（如HCT116） 和敲除细胞系（如U2OS） 作为阴阳对照。

IF共定位实验：

细胞处理：HeLa细胞经5Gy γ射线照射（诱导DNA损伤，激活ARF表达），4%多聚甲醛固定15分钟；

荧光标记：p14ARF抗体（Alexa Fluor 488标记，绿色）与p53抗体（Cy3标记，红色）共染，共聚焦显微镜下观察核内共定位（重叠区域呈黄色）。

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