5-脂氧合酶重组兔单抗
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产品名称 5 Lipoxygenase Recombinant Rabbit mAb 产品介绍
商品属性：
抗体来源Rabbit 克隆类型Recombinant 交叉反应Human,Mouse,Rat 产品应用WB=1:500-2000,IHC-P=1:200-5 00,IHC-F=1:200-500,IF=1:200-500 not yet tested in other applications. optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user. 理论分子量78 kDa 细胞定位细胞核 细胞浆 细胞膜 性 状Liquid 免 疫 原A synthesized peptide derived from human 5 Lipoxygenase: 120-155 亚 型IgG 纯化方法affinity purified by Protein A 缓 冲 液0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol. 保存条件Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. 注意事项This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. PubMedPubMed 产品特性： 抗体类型：重组兔单克隆抗体 宿主物种：兔 克隆性：单克隆 纯度：免疫亲和纯化，纯度>90% 浓度：1 mg/mL（以产品标签为准） 缓冲液：磷酸盐缓冲液（PBS），pH 7.4，含稳定剂及防腐剂 保存条件：-20℃长期保存，避免反复冻融；短期可于4℃保存1个月。 应用范围： 免疫印迹（WB）：推荐稀释比例1:500-2000，用于检测ALOX5蛋白表达。 流式细胞术（Flow-Cyt）：推荐稀释比例1μg/Test，用于细胞表面或细胞内抗原分析。 免疫组化（IHC）：石蜡切片需抗原修复，推荐稀释比例1:100-500。 免疫荧光（IF）：推荐稀释比例1:100-500，适用于细胞或组织定位。 酶联免疫吸附试验（ELISA）：推荐稀释比例1:5000-10000，用于定量检测。 制备过程步骤： 1. 动物免疫 选择动物：通常选用健康的新西兰白兔，体重在2-3kg之间。 免疫原制备：将5-脂氧合酶（5-LOX）蛋白与佐剂（如弗氏完全佐剂）混合乳化，形成稳定的免疫原。 免疫程序： 初次免疫：每只兔子皮下或肌肉注射100-500μg抗原。 加强免疫：间隔2-4周，每次注射50-200μg抗原，共进行3-5次免疫。 2. B细胞收集 取材：最后一次免疫后1-2周，通过手术摘取兔子的脾脏。 制备单细胞悬液：将脾脏置于无菌平皿中，用注射器活塞轻轻研磨，释放淋巴细胞，制成单细胞悬液。 B细胞分离：通过离心等方法收集B细胞。 3. 骨髓瘤细胞制备 细胞系选择：常用骨髓瘤细胞系如SP2/0或NS-1。 培养条件：在含有10%-20%胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养，细胞密度维持在1×10⁵-5×10⁵个/mL，培养温度为37℃，5% CO₂孵育箱中培养。 细胞状态：取处于对数生长期的骨髓瘤细胞用于融合。 4. 细胞融合 细胞比例：将收集的B细胞与骨髓瘤细胞按一定比例（通常为1:1-10:1）混合。 融合剂：加入聚乙二醇（PEG，浓度一般为40%-50%）诱导细胞融合，融合时间为1-2分钟。 终止反应：缓慢加入无血清培养基终止融合反应，离心弃上清，将融合后的细胞重悬于含有HAT的选择性培养基中。 接种培养：将融合后的细胞接种到96孔细胞培养板中，每孔细胞数约为1×10⁵-5×10⁵个。 5. 杂交瘤细胞筛选 培养条件：在HAT选择性培养基中培养1-2周，未融合的B细胞和骨髓瘤细胞会死亡，只有融合成功的杂交瘤细胞能够生长。 筛选方法：通过酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法筛选出能够分泌特异性抗体的杂交瘤细胞阳性孔。 6. 单克隆抗体制备 体外培养：将筛选出的杂交瘤细胞进行体外培养，从培养液中分离提取单克隆抗体。 体内制备：将杂交瘤细胞移植到小鼠腹腔内，从小鼠腹水中分离提取单克隆抗体。
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