人异锁链素(IDES)检测试剂盒样品收集、处理及保存方法:

1)血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2)血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3)细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4)组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液

5)保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

操作步骤:

夹心法,一般的操作步骤为:

将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体;

加入待测检体,检体中若含有待测的抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结;

洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一的一次抗体,与待测抗原进行键结;

洗去多余未键结一次抗体,加入带有酶的二次抗体,与一次抗体键结;

洗去多余未键结二次抗体,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或仪器读取呈色结果;

间接法,一般的操作步骤为:

将已知的抗原固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余的抗原。

加入待测检体,检体中若含有待测的一次抗体,则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。

洗去多余待测检体,加入带有酶的二次抗体,与待测的一次抗体键结。

洗去多余未键结二次抗体,加入酶底物使酶呈色,藉仪器测定塑胶盘中的吸光值,以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。

竞争法,其操作步骤为:

将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体

加入待测检体,使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结

加入带有酶的抗原,此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结,由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限,因此当检体中抗原的量越多,则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少,亦即,两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结,即所谓竞争法之由来。