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猪肠道杯状病毒RT-LAMP试剂盒实验使用方法
2021.01.05   点击144次

猪肠道杯状病毒RT-LAMP试剂盒实验使用方法:


一、猪肠道杯状病毒RT-LAMP试剂盒50次稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。


1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。


2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,*用带芯枪头,下同)。


3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照(浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。


4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。


5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。


6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。


二、样品 DNA 的制备


7. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。


8. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。


三、设置 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)


9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于PCR 阳性对照。

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